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肺孢子虫性肺炎患者呼出的空气中耶氏肺孢子虫的分布研究

发布人:pli 来源: 发布时间:2017-02-17 16:56:24

Quantification and Spread of Pneumocystis jirovecii in the Surrounding Air of Patients with Pneumocystis Pneumonia

Saint Louis Hospital, APHP, France

背景

耶氏肺孢子虫(Pneumocystis jirovecii)是引起免疫抑制病人患有肺孢子虫性肺炎(Pneumocystis pneumonia,PCP)的主要病原体。在动物模型中,空气传播已被证实是肺孢子虫传播的主要途径。肺孢子虫在人际间传播也极有可能通过空气进行。受限于现有采样技术,鲜有报道研究患者呼出空气中耶氏肺孢子虫的分布情况。耶氏肺孢子虫无法人工培养,所以常规的撞击式平板培养法不适用于耶氏肺孢子虫的采样。此外,常规采样方法过程繁琐。将病原体从固相载体中分离出来也十分困难。这使得我们寻找一种既可以采集也可以量化空气中耶氏肺孢子虫的替代方法。本研究使用Coriolis生物气溶胶采样器进行采样结合Real-time PCR的方法进行检测,最后对肺孢子虫性肺炎患者呼出的空气中耶氏肺孢子虫的分布进行了评估[1]

材料与方法
  1. 在每位患者房间,使用Coriolis® μ采样器进行采样。
  2. 使用Coriolis采样器在距离患者头部1m、3m、5m和8m的距离分别采集1.5 m3的空气样品,空气对照样品分别采自病房进门处和走廊处。
  3. 将液体样品以1300 g速度离心10 min,去除上清液,留有1 mL沉淀物保存于4℃冰箱中。
  4. 取200 μL样本沉淀物,使用QIAamp DNAMini Kit(Qiagen)提取试剂盒进行DNA提取。
  5. 采用基于线粒体大亚基rRNA基因(mtLSU)的荧光定量PCR(a real-time quantitative PCR)对样品进行耶氏肺孢子虫的检测和定量分析。
结果

在56个样品中,33个样品属于阳性样品。距离患者头部越远采集的样品的阳性率越低。距离患者头部1 m、3 m、5 m和8 m处采集样品的阳性率分别为78.9%(15/19)、69.2%(9/13)、41.7%(5/12)和33.3%(4/12)。

本研究首次得出了肺孢子虫性肺炎患者呼出空气中耶氏肺孢子虫分布的相关数据。

结论

Coriolis® μ生物气溶胶采样器可在短时间内采集大量的空气样品,并且将空气中的微生物富集在小体积的收集液里,这对肺孢子虫的采集效率和检测是非常重要的。使用Coriolis采集器采样结合Real-time PCR检测方法,可用于无法培养微生物的流行病学调查,例如肺孢子虫。

本研究为空气中耶氏肺孢子虫与其他空气中病原体的定量风险评价提供了有效的途径。


[1] Choukri F, Menotti J, Sarfati C, Lucet JC, Nevez G, Garin YJ, et al. Quantification and spread of Pneumocystis jirovecii in the surrounding air of patients with Pneumocystis pneumonia. Clinical infectious diseases : an official publication of the Infectious Diseases Society of America. 2010;51:259-65.